CHO 殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)

 試劑盒簡(jiǎn)介：

CHO 殘留DNA 檢測(cè)試劑盒是用于定量檢測(cè)各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成 品中殘留的 CHO  宿主細(xì)胞 DNA。

本試劑盒利用 Taqman 探針法， 定量檢測(cè)樣本中 CHO  殘留 DNA。該方法具有速度快、 特異性高、  性能可靠且最di檢測(cè)限可達(dá)到 fg 級(jí)別。

試劑盒組份：

表 1：試劑盒組份

規(guī)格 ：100  反應(yīng)

適用機(jī)型：

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)

實(shí)驗(yàn)所需但試劑盒未包含材料：

? 1.5ml 無菌低吸附離心管

? 96 孔 qPCR  板

? 一次性手套

? 1000ul 、100ul 、10ul 無菌低吸附帶濾芯移液槍頭

相關(guān)設(shè)備：

?  離心機(jī)

? 渦旋振蕩器

? 熒光定量 PCR 儀

? 1000ul 、100ul 、10ul 移液器

CHO 殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)qPCR 程序參數(shù)設(shè)置(以 ABI 7500 為例)：

1.創(chuàng)建空白新程序，選擇絕對(duì)定量檢測(cè)模塊。

2.創(chuàng)建新檢測(cè)探針，命名為 CHO-DNA，選擇報(bào)告熒光基團(tuán)為 FAM，淬滅基團(tuán)為 none,檢測(cè) 參比熒光為 ROX。

3.設(shè)置兩步法反應(yīng)程序： 50oC 2min, 95oC 預(yù)變性 10min；95oC 10 sec，60oC 1min，40 個(gè)循環(huán)； 反應(yīng)體積為 30ul。

qPCR 結(jié)果分析(以 ABI 7500 為例)

1.在 Results 的 Amplification  plot 面板中， 將 Threshold 設(shè)置為 0.05 ，點(diǎn)擊 Analyze，此時(shí)可 初步查看擴(kuò)增曲線的形態(tài)是否正常。

2.在 Results  的 Plate 面板中，將標(biāo)準(zhǔn)曲線孔的 Task 一欄設(shè)置為 Standard，并且在 Quantity 一欄分別賦值為 3000 、300 、30 、3 、0.3 、0.03  (含義為每孔的 DNA 量， 單位為 pg)， 并且

在相應(yīng)的 Sample Name 一欄命名為 SD1 、SD2 、SD3 、SD4 、SD5 、SD6。

3.在 Results 的 Plate 面板中，將無模板對(duì)照 NTC 孔的 Task 一欄設(shè)置為 NTC，將陰性質(zhì)控 NEG 孔、待測(cè)樣本孔、樣本 ERC 孔的 Task 一欄設(shè)置為 Unknown，并且在相應(yīng)的 Sample Name 一欄中命名為 NTC 、NEG 、S 、ERC ，之后點(diǎn)擊開始鍵。

4.在 Results 的 Standard Curve  面板中，可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R2 。

5.在 Results 的 Report 面板中， Mean Quantity 一欄可讀取無末班對(duì)照 NTC、陰性質(zhì)控 NEG、 待測(cè)樣本、樣本 ERC 的檢測(cè)值。后續(xù)可在檢測(cè)報(bào)告中將單位換算為 pg/ml  樣本。

注:根據(jù)待測(cè)樣本和樣本 ERC 的檢測(cè)結(jié)果計(jì)算加樣回收率，加樣回收率要求在 50%- 150%之 間。

1g立枯絲核菌Human Fcγ(Fc Fragment of IgG) ELISA Kit

25g盤長(zhǎng)孢狀刺盤孢Human miRNA-210 ELISA Kit

5g紅鬼筆Human anti-SARS-CoV2(N) IgG ELISA Kit

25g伯克霍爾德菌Human ALOX5(Arachidonate Lipoxygenase 5) ELISA Kit

5g環(huán)圈鏈霉菌Human Hsd17b13( 17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 13) ELISA Kit

1g毒青霉Human SEPTIN7(septin-7) ELISA Kit

5g阿舒假囊酵母Human anti-SARS-CoV2(N) IgM ELISA Kit

1g曲霉屬Human anti-2019 nCoV(S) IgM ELISA Kit

5g解脂假絲酵母Human anti-2019 nCoV(S) IgG ELISA Kit

25MG白布勒擔(dān)孢酵母Human OTUD5(OTU domain containing 5) ELISA Kit

25g白靈側(cè)耳Human MARK2 ELISA Kit

5g靈芝屬Human MARK3 ELISA Kit

1g黑木耳Human MARK1 ELISA Kit

250mg美澳型核果褐腐病菌Human MARK4 ELISA Kit

100g玉米大斑病菌Human MARS ELISA Kit

25g棕褐小單孢菌Human MARVELD2 ELISA Kit

10mg猴頭Human C1orf31(Cytochrome c oxidase assembly factor 6 homolog) ELISA Kit

CHO 殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)

Kovacs氏靛基質(zhì)試劑人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞  原代上皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基BSA (bovine serum albumin)  牛血清白蛋白（第五組分）

V-P甲、乙液試劑人腦血管平滑肌細(xì)胞  原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基KLH (keyhole limpet hemocyanin)  血藍(lán)蛋白

1%亞碲酸溶液人腦血管外膜成纖維細(xì)胞  原代平滑肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基OVA (ovalbumin)  雞卵白蛋白

亮綠瓊脂人腦血管周細(xì)胞  原代成纖維細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基THY (thyroglobulin,TG)  甲狀腺球蛋白

平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA)人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞  原代心肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基HSA/human Serum albumin  人血清白蛋白

假單胞分離瓊脂人脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞  原代系膜細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Streptavidin, SA  鏈霉親和素

假單胞分離肉湯人腦膜細(xì)胞  原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Protein G/FITC  FITC標(biāo)記蛋白-G