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糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒紫外分光光度法

簡(jiǎn)要描述:糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒紫外分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:三苯四唑營(yíng)養(yǎng)瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)TCC Nutrient Agar250克用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定時(shí)防止菌落蔓延三苯四唑吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)TTC Lecithin Tween 80 Nutrient Agar250克用于化妝品中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定胰蛋白胨大豆聚酸酯瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)TAT Broth250克化妝品微生物檢測(cè)甘進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Glycine

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-24
  • 訪  問  量:801

詳細(xì)介紹

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒紫外分光光度法

50管/24樣

紫外分光光度法

BK-01S6985

商品介紹:

測(cè)定意義:

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GPEC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開α-14-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶aGPa)和無活性的糖原磷酸化酶bGPb)兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)存在下可被激活。

測(cè)定原理:

GP催化糖原和無機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)時(shí)測(cè)定GPGPaGPb)活性,未添加腺苷酸(5,-AMP)時(shí)測(cè)定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長(zhǎng)期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

 

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

1瓶 U27細(xì)胞株 U27 低溫運(yùn)輸和保存

顯色(第二代)  1000ml

100mg 遺傳 G-418 Sulfate (Geneticin) 4℃保存

50T 紅薯內(nèi)源基因PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

30µL 植物Actin小鼠單抗 Plant Actin Mouse MAb -20℃保存

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA) Violet Red Bile Agar 250g

2mL 巰基磁珠  Magnetic beads,Sulfydryl 4℃密閉、豎直保存

2 ug pEYFP-mem pEYFP-mem 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

大豆酪蛋白瓊脂(TSA)平板(15cm)  10個(gè)/包

1瓶 BNL CL.2細(xì)胞株 BNL CL.2 低溫運(yùn)輸和保存

LB肉湯顆粒 LB Broth 300ml/袋*10

糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒紫外分光光度法TNIP2/ABIN2/TNFAIP3 interacting protein 2  瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3相互作用蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

HIV gp120  艾滋毒抗體 規(guī)格: 0.1ml

FASP1/C21orf45  MaFF相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgG  規(guī)格: 0.1ml

ODZ3/Teneurin 3  固生蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Paxillin (Tyr118)  磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規(guī)格: 0.1ml

PPAR-delta/beta  D型-過氧化活化增生受體抗體 規(guī)格: 0.1mlABHD1  肺α/β水解蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Lck (Tyr505)  磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪激抗體 規(guī)格: 0.1mlResistin  抵抗素抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1mlLRP/MVP  肺耐藥相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

C4orf42  4號(hào)染色體開放閱讀框42抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml

phospho-Tau protein(Thr489)  磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlSmoothened/SMO  跨膜蛋白Smoothened抗體 規(guī)格: 0.1ml

APG4B/AUTL1  自噬相關(guān)蛋白4B抗體 規(guī)格: 0.2mlTUSC3  前列抑蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

FRMD7  FRMD7蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-JunB(Ser259)  磷酸化活化蛋白激B抗體 規(guī)格: 0.1ml

Nox4/NADH  NADPH氧化4抗體 規(guī)格: 0.1mlNF-L/Neurofilament L/Neurofilament 68  低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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