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簡(jiǎn)要描述:淀粉磷酸化酶(SP)測(cè)試盒紫外分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:固氮菌用阿須貝氏培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Nitrogen-fixing bacteria with the A Sugai’s medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 無(wú)機(jī)磷細(xì)菌培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Inorganic phosphorus bacteria 產(chǎn)品規(guī)格:250g 有機(jī)磷細(xì)菌培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Bacterial organophosphor
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng):淀粉磷酸化酶(SP)測(cè)試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6694
產(chǎn)品分類(lèi):淀粉系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 淀粉磷酸化酶(Starch Phosphorylase,SP)是淀粉代謝過(guò)程的可逆反應(yīng)酶,既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解。 在高等植物中,淀粉磷酸化酶(合成方向)主要存在于質(zhì)體中,負(fù)責(zé)延長(zhǎng)淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端;淀粉磷酸化酶(分解方向)主要存在于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中,催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,負(fù)責(zé)葡萄糖鏈的磷酸解,是淀粉代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶。 在植物體中,淀粉磷酸化酶分解方向的底物無(wú)機(jī)磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個(gè)數(shù)量級(jí),一般認(rèn)為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解,因此,分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測(cè)定意義。 測(cè)定原理: 淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無(wú)機(jī)磷反應(yīng)產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖-6-磷酸,并在6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原NADP+產(chǎn)生NADPH,使340nm下吸光值增加。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
假單胞CFC選擇性培養(yǎng)基添加劑(凍干) 1ml*5
1瓶 Ls-174-T細(xì)胞株 Ls-174-T 低溫運(yùn)輸和保存
TGE瓊脂 TGE Medium 250g
1g 可溶性 B Amphotericin B Solubilized -20℃保存
100mL TABS Buffer,0.2M,pH9.5 TABS Buffer,0.2M,pH9.5 常溫保存
50次 糖蛋白蛋白純化試劑盒
2 ug pspT18 pspT18 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
15次 非DNA清除劑-2 DNA Erasol-2 4℃保存
100mL PBS-EDTA Solution,5X PBS-EDTA Solution,5X 常溫保存
胰酪胨大肉湯基礎(chǔ) Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base 250g
100g 聚乙烯吡咯烷酮 K-30 Polyvinylpyrrolidone(PVP K-30) 室溫密閉干燥保存
淀粉磷酸化酶(SP)測(cè)試盒紫外分光光度法MIDN 中腦核仁蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Glucagon 抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Guinea pig IgG 兔抗豚鼠IgG 規(guī)格: 1mg
NeuN 神經(jīng)元核抗原抗體 規(guī)格: 0.1ml
XKR1 膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白XK抗體 規(guī)格: 0.2ml
GLB1L3 β半糖苷1樣蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
P63 protein/P51A P63 瘤抑制基因抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-IKK beta(S474) 磷酸化KB抑制蛋白激β抗體 規(guī)格: 0.1ml
FASTKD2 Fas活化激結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml
NLGN4X 神經(jīng)元X連鎖蛋白抗體(兒童自閉癥相關(guān)蛋白) 規(guī)格: 0.2ml
MBD1/PCM1 甲基化CpG結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
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