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簡要描述:順烏頭酸酶(ACO)測試盒紫外分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:李斯特氏菌增菌肉湯(LEB) 英文名稱:Listeria Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g PALCAM肉湯 英文名稱:PALCAM Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g PBS緩沖液(PH7.4) 英文名稱:PBS Solution 產(chǎn)品規(guī)格:250g 7%羊血瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱:7%Sheep Blood Agar Ba
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注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱:順烏頭酸酶(ACO)測試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/50樣
檢測方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號:BK-01S6596
產(chǎn)品分類:三羧酸循環(huán)系列
商品介紹:
測定意義: 順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環(huán)中的酶,催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,通過脫水與加水反應(yīng),使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進一步的氧化脫羧反應(yīng)作準備。 測定原理 ACO催化檸檬酸轉(zhuǎn)化成異檸檬酸,異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH,導(dǎo)致340nm處光吸收上升。 需自備的儀器和用品 紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
25mL Tricine-SDS Sample Buffer,2X), reducing Tricine-SDS Sample Buffer,2X), reducing 常溫保存
100µL 小鼠抗c-Myc標簽單抗 Anti c-Myc-Tag Mouse MAb -20℃保存
2 ug PT2/GFP PT2/GFP 低溫運輸,-20℃保存
100mL RNase-free PVP K30溶液,20% 常溫
2 ug pCYB 1 pCYB 1 低溫運輸,-20℃保存
產(chǎn)芽孢肉湯 Sporulation Broth 250g
5g D- 核糖 D-Ribose 4℃保存
50T 炭疽桿菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
100mg SMT(iNOS抑制劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
250mL Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and EGTA (GVBMG) Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and EGTA (GVBMG) 常溫保存
10uL HRP標記的抗抗體 Anti Biotin Ab,HRP 4℃保存
順烏頭酸酶(ACO)測試盒紫外分光光度法Rabbit Anti-Avidin/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1ml
phospho-Smad3(Ser204) 磷酸化細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體 規(guī)格: 0.1ml
XRCC1 X射線修復(fù)交叉互補蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
TSPAN6 四分子交聯(lián)體6抗體(四旋蛋白) 規(guī)格: 0.2ml
GFAP 膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
RPL19 核糖體蛋白L19抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-human IgG/AP 堿性磷酸(AP)標記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
CEP97 中心體蛋白97kDa抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-13Ra2 白細胞介素-13受體a2抗體 規(guī)格: 0.1ml
SCRO/DCUN1D1 鱗狀細胞相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-M-CSF Receptor(Tyr546) 磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
PPIB/Cyclophilin B 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIB抗體 規(guī)格: 0.2ml
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