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簡(jiǎn)要描述:磷脂酶A2(PLA2)測(cè)試盒可見分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:瓊脂培養(yǎng)基S 英文名稱:Agar medium S(R2A) 產(chǎn)品規(guī)格:250g RV肉湯(EP) 英文名稱:Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 鹽瓊脂 英文名稱:Mannitol Salt Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 瓊脂培養(yǎng)基K(XLD瓊脂) 英文
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注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:磷脂酶A2(PLA2)測(cè)試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
檢測(cè)方法:可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6660
產(chǎn)品分類:脂肪酸代謝系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 磷脂酶A2(EC3.1.1.4)是磷脂sn-2位脂酰基水解酶,廣泛存在于動(dòng)植物組織、細(xì)菌、細(xì)胞核分泌物中,參與脂肪消化,精子成熟、細(xì)胞信號(hào)傳遞、脂質(zhì)過氧化修復(fù)、宿主反應(yīng)等生理過程,在控制體內(nèi)磷脂類物質(zhì)平衡、調(diào)節(jié)機(jī)體新陳代謝、參與疾病的病理進(jìn)程等方面發(fā)揮著及其重要的作用。 測(cè)定原理 磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸(HEPC)產(chǎn)生游離巰基,與DTNB反應(yīng)生成黃色物質(zhì),在412nm處有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、超速冷凍離心機(jī)、研缽、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
1000 U 限制性內(nèi)切PstI Restriction Endonuclease -20℃保存
100mL Sodium Cacodylate Buffer(二甲胂酸鈉緩沖液),0.1M,pH6.8 Sodium Cacodylate Buffer,0.1M,pH6.8 常溫保存
1 管 BL21大腸桿菌 BL21 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pQE-Tirs pQE-Tirs 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
HBI單增李斯特氏菌生化鑒定條(GB) 5條/盒
2 ug pcDNA3 YFP pcDNA3 YFP 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
WORT肉湯 Wort Broth 250g
2mg 亮抑肽 Leupeptin -20℃保存
鹽增菌液(SF) Selenite Enrichment Medium 250g
5mL 上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
10g ATP Solution(ATP溶液),100mM ATP Solution,100mM 常溫保存
磷脂酶A2(PLA2)測(cè)試盒可見分光光度法Filaggrin 兜甲蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Tyk2(Tyr1054/1055) 磷酸化非受體酪蛋白激2抗體 規(guī)格: 0.1ml
FGF4 纖維母細(xì)胞生因子4抗體 規(guī)格: 0.1mlCD150/SLAMF1 信號(hào)淋巴細(xì)胞活化分子CD150抗體 規(guī)格: 0.2ml
ENPP7 堿性鞘磷脂7抗體 規(guī)格: 0.1mlLCE2B 晚期包膜蛋白2B抗體 規(guī)格: 0.2ml
SAA4/Serum amyloid A 4 protein 清淀粉樣蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2mlPMS2 瘤錯(cuò)配修復(fù)基因PMS2抗體 規(guī)格: 0.1ml
CPA1/Carboxypeptidase A 胰羧肽A1抗體 規(guī)格: 0.1mlRNF56/CBLB 環(huán)指蛋白56 規(guī)格: 0.2ml
C Peptide C-肽抗體 規(guī)格: 0.1ml
EML3 微管相關(guān)蛋白樣蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
Acetyl-p53(K382) 乙酰化P53(Lys382)抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CDKN2A/P16 (Ser152) 磷酸化抑基因p16抗體 規(guī)格: 0.1ml
ABCG8 三磷酸苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員8抗體 0.2ml
STAT6 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體 規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
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