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簡(jiǎn)要描述:多功能氧化酶(MFO)測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:60g/L氯化鈉蛋白胨肉湯 英文名稱:60g%/L NaCl Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格:250g 氯化鈉三糖鐵瓊脂 英文名稱:NaCl Triple Sugar Iron Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 胰胨大豆瓊脂斜面(TSA) 英文名稱:Tryptic Soy Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 42℃生長(zhǎng)培養(yǎng)基 英文名稱:42℃gro
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:多功能氧化酶(MFO)測(cè)試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
檢測(cè)方法:微量法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6474
產(chǎn)品分類:氧化與抗氧化系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶,可產(chǎn)生降解反應(yīng),可使原化學(xué)物質(zhì)變?yōu)榈投镜幕驘o(wú)毒的物質(zhì)從體內(nèi)排出;還可產(chǎn)生激活反應(yīng),可使原化學(xué)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有親電子性質(zhì),導(dǎo)致毒性增強(qiáng),成為致突變物或終致癌物。近年來(lái)對(duì)混合功能氧化酶系與外源性化學(xué)物質(zhì)相互作用的深入研究,對(duì)于從分子生物學(xué)水平上進(jìn)一步了解外源性化學(xué)物質(zhì)的毒作用具有重要意義。 測(cè)定原理: MFO催化對(duì)硝基苯甲醚產(chǎn)生對(duì)硝基,在405nm下有特征吸光值。 自備用品: 分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
5g 3- 氨基 -9- 乙基咔唑 AEC (3-Amino-9-Ethylcarbazole) 常溫保存
100mL TES Buffer,0.2M,pH7.0 TES Buffer,0.2M,pH7.0 常溫保存
100µL 小鼠抗CBP標(biāo)簽單抗 Anti CBP-Tag Mouse MAb -20℃保存
2 ug pTALEN_v2 (NG) pTALEN_v2 (NG) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
100g RNCTAB (十六烷基基) 常溫
2 ug pDEST20 pDEST20 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
梭菌鑒別瓊脂(DCA) Differentia Clostridial Agar 250g
150mL 丙烯葡聚糖凝膠 S-300 HR Sephacryl S-300 HR 室溫保存
TTC TTC 10g
2 g Tocopherol(抗氧化劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
250ml Glycine Buffer in PBS,0.2M,pH2.5 Glycine Buffer in PBS,0.2M,pH2.5 常溫保存
多功能氧化酶(MFO)測(cè)試盒微量法TRIM36/RNF98 環(huán)指蛋白98抗體 規(guī)格: 0.2ml
Biglycan 骨/軟骨蛋白多糖1抗體 規(guī)格: 0.2ml
GM1(GS) 神經(jīng)節(jié)苷酯抗體 規(guī)格: 0.1ml
DECTIN-1/CLECSF12/beta Glucan Receptor β葡聚糖受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1ml
FAM151A FAM151A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
NME1/Nm23-H1/NDKA 瘤抑制基因抗體 規(guī)格: 0.1ml
FAM71A FAM71A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
srGAP3 神障礙相關(guān)GAP蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1ml
JAMC 連接粘附分子C抗體 規(guī)格: 0.2ml
BAGE4 瘤/睪抗原2.4抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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