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簡(jiǎn)要描述:蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒紫外分光光度法輔酶Ⅱ系列公司正在出售的產(chǎn)品:3%氯化鈉堿性蛋白胨水 英文名稱:3%Sodium Chloride Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格:9ml*20支/包 0.85%無(wú)菌生理鹽水(9ml/支) 英文名稱:0.85% Sterile Saline 產(chǎn)品規(guī)格:9ml*20支/包 0.85%無(wú)菌生理鹽水(10ml/支) 英文名稱:0.85% Sterile Sa
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6368
產(chǎn)品分類(lèi):輔酶Ⅱ系列
商品介紹:
測(cè)定意義: SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷鍵,催化葡萄糖基轉(zhuǎn)移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相應(yīng)的葡萄糖基低聚糖。此外,SP還能催化合成熊果苷,具有的美白效果,在化妝品工業(yè)中具有重要應(yīng)用。 測(cè)定原理: SP能夠以磷酸為受體,催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。測(cè)定340nm吸光度增加速率,即可計(jì)算SP活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器: 天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1mL石英比色皿和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
1瓶 PA317細(xì)胞株 PA317 低溫運(yùn)輸和保存
兔血漿 Rabbit plasma 0.5ml*10
50g 酪蛋白 Casein From Bovine Milk 室溫干燥保存
500mL Wash Buffer Wash Buffer 常溫保存
100U 二酯Ⅰ Phosphodiesterase I -20℃保存
2 ug pUSE (Amp) pUSE (Amp) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
50次 柱式海洋動(dòng)物DNAout Column Marine Animal DNAOUT 常溫
2 ug p3×FLAG-CMV-8 p3×FLAG-CMV-8 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基 LBS Agar 250g
25g 1:250 Trypsin 1:250 Porcine Pancreas 4℃保存
50T 豬腦心肌炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒紫外分光光度法Integrin beta 6 整合素β6抗體(Integrin β6) 0.2mlAdenylate Kinase 1/AK1 苷酸激-1抗體 規(guī)格: 0.2ml
LAMP-3/DC-LAMP/CD208 溶體相關(guān)膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER3(Tyr1328) 磷酸化HER3受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Exendin 4 GLP1類(lèi)似蛋白Exendin4抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-LSP1 (Ser204) 磷酸化白細(xì)胞F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-Bovine IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1mlCR1/CD35 Ⅰ型補(bǔ)體受體抗體(C3b/C4b受體抗體) 規(guī)格: 0.1ml
KLHL36/C16orf44 Kelch樣蛋白36抗體 規(guī)格: 0.2mlCASC5 瘤易性候選基因5抗體 規(guī)格: 0.2ml
GABRA1 G1氨基丁酸A型受體α1抗體 規(guī)格: 0.1mlTIMP-2 金屬蛋白組織抑制因子-2抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-APE(Ser1417) 磷酸化肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體 規(guī)格: 0.1mlDC-SIGN/CD209 細(xì)胞間粘附分子非整合素蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 0.1mlPLGLB2 纖溶相關(guān)蛋白B2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Cdc7 細(xì)胞分裂周期蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1mlAKT3 蛋白激B3 規(guī)格: 0.1ml
HSPBAP1 熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlGRM2/GLUR2 促代謝型谷受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml
TTC23 宮頸原基因8抗體 規(guī)格: 0.2mlCytokeratin 13/CK-HMW 高分子量細(xì)胞角蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
RIT1 RIT1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlTPSB2 肥大細(xì)胞類(lèi)胰蛋白β2 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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