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簡(jiǎn)要描述:NAD蘋(píng)果酸酶(NADME)測(cè)試盒紫外分光光度法輔酶Ⅱ系列公司正在出售的產(chǎn)品:含100mlBolton肉湯均質(zhì)袋 英文名稱:Bolton Broth 產(chǎn)品規(guī)格:10個(gè)/包 Bolton肉湯添加劑 英文名稱:Bolton Broth Supplement 產(chǎn)品規(guī)格:1ml/支*5 含225ml胰酪胨大豆肉湯均質(zhì)袋 英文名稱:Trypticase Soy Polymyxin Broth 產(chǎn)品規(guī)格:10
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注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:NAD蘋(píng)果酸酶(NADME)測(cè)試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6360
產(chǎn)品分類(lèi):輔酶Ⅱ系列
商品介紹:
測(cè)定意義: ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋(píng)果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋(píng)果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物ME活性測(cè)定較多,已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。 測(cè)定原理: NAD-ME催化NAD+還原成NADH,在340nm下測(cè)定NADH增加速率。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
改良馬丁液體培養(yǎng)基 250ml*20瓶
2 ug pSTAT1-Luc pSTAT1-Luc 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基顆粒 Lactose Bile Broth 300ml/袋*10
10次 克必隆eTS 超敏PCR法cDNA合成試劑盒
50mL Nickel Sulfate Solution(硫酸鎳溶液),0.5M Nickel Sulfate Solution,0.5M 常溫保存
20次 即用型藍(lán)白T載體D型(無(wú)啟動(dòng)子,有MCS) Instant Blue-White Vector T,Type D -20℃保存
2 ug pMKO.1-puro pMKO.1-puro 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
酵母浸粉(進(jìn)口) Yeast Extract Powder 250g
1瓶 SP2/0細(xì)胞株 SP2/0 低溫運(yùn)輸和保存
BPL瓊脂 BPL Agar 250g
2 ug pIRES2-AcGFP1 pIRES2-AcGFP1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
NAD蘋(píng)果酸酶(NADME)測(cè)試盒紫外分光光度法ARK5 AMPK的相關(guān)蛋白激5抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-Biotin whole serum 兔抗抗清 規(guī)格: 1ml
Goat anti-Mouse IgM whole serum 羊抗小鼠IgM抗清 規(guī)格: 1ml
phospho-Myosin light chain(Ser20) 磷酸化肌球蛋白輕鏈抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Bcr(Tyr177) 磷酸化T淋巴細(xì)胞受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Hornerin/S100A18 角化蛋白S100A16抗體 規(guī)格: 0.2ml
CCDC16/zinc finger protein 830 鋅指蛋白830抗體 規(guī)格: 0.2ml
Histone H3-like protein 組蛋白H3樣抗體 規(guī)格: 0.2ml
Streptokinase 鏈激抗體 規(guī)格: 0.1mlMast Cell Chymase 肥大細(xì)胞類(lèi)糜蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Galectin 7 半糖凝集素7抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Avidin/FITC FITC標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1ml
PPAP2A 磷酸脂磷酸水解1抗體 規(guī)格: 0.1mlP2Y4 P2Y4受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
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