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NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法

簡(jiǎn)要描述:NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法輔酶Ⅰ系列公司正在出售的產(chǎn)品:營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)顆粒 英文名稱:Nutrient Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA)顆粒 英文名稱:Nutrient Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆瓊脂(TSA-YE)顆粒 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:300ml*10 平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA)顆粒 英文名稱:Plate Count Agar 產(chǎn)品規(guī)

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-29
  • 訪  問(wèn)  量:507

詳細(xì)介紹

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長(zhǎng)期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法

100管/48樣

微量法

BK-01S6323

商品介紹:

測(cè)定意義

測(cè)定意義:

NADKEC 2.7.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)ATP或無(wú)機(jī)多聚磷酸[poly(P)]作為磷酰基供體進(jìn)行磷酸化反應(yīng),生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)NADP(H)的平衡上具有重要作用。

測(cè)定原理:

NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT),通過(guò)在600 nm下測(cè)定MTT的還原速度(吸光值的變化)可反映出NADK活性的大小。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
11.png

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

100mL 非凍型組織RNA保存液 RNALOCKER 常溫

200 mL 小鼠內(nèi)皮細(xì)胞分離液1.071 Cell Separation Solution -20℃保存

250mL HEPES Buffer,1M,pH7.6  HEPES Buffer,1M,pH7.6  常溫保存

2mL dATP溶液,2.5mM dATP Solution -20℃保存

2 ug pLentilox 3.7 pLentilox 3.7 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

沙氏葡萄糖瓊脂 Sabouraud’s Glucose Agar 250g

1瓶 MPC-11細(xì)胞株 MPC-11 低溫運(yùn)輸和保存

心浸液瓊脂 Heart Infusion Agar 250g

5g 四氧 Alloxan Momohydrate 4℃保存

100mL Tricine Buffer,0.5M pH7.4  Tricine Buffer,0.5M pH7.4  常溫保存

50次 DNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)(200-1500bp) DNAMETER 4℃保存

NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法phospho-NDEL1(Ser242)  磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體 規(guī)格: 0.1mlC3a Receptor/C3aR  過(guò)敏毒素C3受體/補(bǔ)體C3受體抗體 0.2ml

Rabbit Anti-human sIgA/HRP  辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗人IgA 規(guī)格: 0.1mlTIF1 Alpha/TRIM24  轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體 規(guī)格: 0.2ml

TRAF4/CART 1  瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1mlCEP55  中心體蛋白55kDa抗體 規(guī)格: 0.2ml

ANKRD26  錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體 規(guī)格: 0.2mlPLC β2/Phospholipase C beta 2  磷酯Cβ2抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-c-Abl(Tyr283)  磷酸化非受體酪激c-Abl抗體 0.1mlRabbit Anti-rat IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

phospho-CBL2(Tyr731)  磷酸化原蛋白CBL2抗體 規(guī)格: 0.1mlKIF3A  驅(qū)動(dòng)蛋白家族蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

COX4/COX IV-1  氧化IV亞型1抗體 規(guī)格: 0.2mlRNF25  環(huán)指蛋白25抗體 規(guī)格: 0.2ml

γ-taxilin/LSR5  脂多糖相關(guān)反應(yīng)蛋白5抗體 0.2mlIFRD1  干擾素相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白1抗體(神經(jīng)生因子誘導(dǎo)蛋白PC4) 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-rat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlphospho-FADD(Ser194)  磷酸化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

SPON2/M spondin/Mindin  細(xì)胞外基質(zhì)底物反應(yīng)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlPARL  骨骼肌細(xì)胞線粒體膜蛋白PARL抗體 規(guī)格: 0.2ml

UFC1  泛素結(jié)合UFC1抗體 規(guī)格: 0.2mlPDGFRL  小板源性生因子受體β樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mesothelioma  間質(zhì)細(xì)胞蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSAMD15/C14orf174  14號(hào)染色體開放閱讀框174 規(guī)格: 0.2ml

 


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