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丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法

簡(jiǎn)要描述:丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法輔酶Ⅰ系列公司正在出售的產(chǎn)品:大腸菌群顯色培養(yǎng)基 英文名稱:Coliform Chromogenic Medium 產(chǎn)品規(guī)格:1000(ML) 大腸桿菌/大腸菌群顯色培養(yǎng)基(第二代) 英文名稱:E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 產(chǎn)品規(guī)格:1000(ML) 大腸桿菌/大腸菌群顯色培養(yǎng)基(平皿) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:9CM

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-30
  • 訪  問  量:1150

詳細(xì)介紹

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱:丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣

檢測(cè)方法:紫外分光光度法

產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6338

產(chǎn)品分類:輔酶Ⅰ系列
商品介紹:

測(cè)定意義

測(cè)定意義:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

測(cè)定原理:

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+NADH340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測(cè)定340 nm光吸收下降速率,來計(jì)算PDC活性。

自備儀器和用品:

研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1ml石英比色皿、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

QQ截圖20220307153537.png 

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

50次 脂蛋白純化試劑盒  

2 ug pSRE-Luc pSRE-Luc 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

50次 柱式DNA清除劑 Column DNA Erasol 4℃保存

2 ug pCMV-SPORT6 TTC12 pCMV-SPORT6 TTC12 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

改良V-P培養(yǎng)基 V-P Medium,Modified 250g

100g 聚乙烯吡咯烷酮 K360 Polyvinylpyrrolidone(PVP K360) 室溫保存

50T 乳腺癌耐藥基因PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

200mg L-NAME(eNOS抑制劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

250mL EDTA Solution(EDTA溶液),14%,pH7.4  EDTA Solution,14%,pH7.4  常溫保存

0.5mL dNTP溶液,2.5 mM dNTP Solution,2.5 mM -20℃保存

2 ug pIRES-EGFP pIRES-EGFP 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法DMRT3  睪特異性DMRT3蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

VGLUT2  囊泡谷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Hpt/Haptoglobin  結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-ATP1A1(Tyr10)  磷酸化鈉鉀ATP蛋白a1抗體 規(guī)格: 0.1ml

mucin 5B/Muc5B  粘蛋白-5B抗體 規(guī)格: 0.2ml

TNFAIP3 interacting protein 3/ABIN3  瘤壞死因子α誘導(dǎo)相互作用蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

LASS2  瘤轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體 規(guī)格: 0.2mlGibberellins  抗赤霉素抗體 0.1ml

CENPP  著絲粒蛋白P抗體 規(guī)格: 0.2mlTIMP-1(NT)  金屬蛋白組織抑制因子-1抗體(N端) 規(guī)格: 0.1ml

ACPT  睪酸性磷酸抗體 規(guī)格: 0.2mlCOPS7A  信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基7A抗體 規(guī)格: 0.2ml

FANCF  范可尼貧相關(guān)蛋白F抗體 規(guī)格: 0.2mlProteasome 20S alpha 3(Ser250)  磷酸化蛋白體PSMα3抗體 規(guī)格: 0.1ml

C9orf156  9號(hào)染色體開放閱讀框156抗體 0.1mlNEU4  神經(jīng)4抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD2AP  白細(xì)胞分化抗原CD2AP抗體 規(guī)格: 0.1mlCDC40  細(xì)胞分裂周期同源蛋白40抗體 規(guī)格: 0.2ml 

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 


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